El ensayo es un IEE ('sandwich') inmunométrico para la medición cuantitativa de AFP en suero o plasma humano. La AFP de muestra está enlazada a 2 anticuerpos anti-AFP dirigidos a diferentes epítopes. Un anticuerpo está enlazado con partículas magnéticas y el otro está indirectamente marcado con fosfatasa alcalina, usando el sistema biotina/estreptavidina. El ensayo tiene cuatro etapas principales:
La anti-AFP magnética y la anti-AFP biotinilada se incuban con la muestra (50 µL) durante 12 - 24 horas a 4 - 8°C (durante la noche en un refrigerador) y sigue un paso de lavado magnético.
Las partículas magnéticas se someten a incubaton con la estreptavidina marcada con fosfatasa alcalina durante 1 hora a 4 - 8°C segiuda par 2 pasos de lavado magnético.
Se incuba un sustrato enzimático coloreado con las partículas durante 30 minutos a 37°C. La presencia de fosfatasa alcalina provoca un cambio de color de amarillo a rosado. La reacción se termina por la adición de Buffer de Parada.
Luego los tubos se colocan en el espectrofotómetro o en el colorímetro. Se puede medir la densidad óptica de cada tubo (a 550nm y 492nm) y los resultados se calculan usando un programa de procesamiento de datos.
0-360 kU/L Calibrados contra 1st Patrón Britiánico 72/227
Valores Previstos
Mujer no embarazada
<25 |kU/L
Líimite de Detección
1 kU/L
Precisión
Intra-ensayo ±1DT
kU/L
%CV
2.3±0.2
6.9
9.0±0.4
4.9
16±0.6
3.7
140±7
5
Precisión
Inter-ensayo ±1DT
kU/L
%CV
2.7±0.3
12.3
9.4±0.3
3.0
16±0.8
4.9
135±12
8.9
El Juego Contiene
Patrones de IEE de AFP - see (*) Anticuerpo Magnético de IEE de AFP Anticuerpo Biotinilado de IEE de AFP Estreptavidina Enzimáticamente Marcada de IEE de AFP Buffer de Ensayo de IEE de AFP Buffer de Lavado de IEE de AFP
Reactivo de Sustrato de IEE Buffer de Sustrato de IEE Buffer de Parada de IEE Muestra QC Interna de IEE de AFP Folleto de Instrucciones
(*) calibrados contra el 1er. Patrón Británico 72/227
Equipo Requerido
Tubos de ensayo, pipetas, mezcladora multivortex, separador magnético, baño de maría de 37°C y un colorímetro o espectrofotómetro