El ensayo es un IEE directo competitivo para la medición cuantitativa del Estradiol en suero o plasma humano. Un agente específico desplaza al Estradiol de las proteínas enlazantes, haciéndolo disponible para su enlace con anticuerpos. Luego el Estradiol logra reaccionar con un anticuerpo anti-Estradiol enlazado con isothiocianato de fluoresceína (ITCF) y Estradiol marcado con fosfatasa alcalina. Después, un anticuerpo anti-ITCF enlazado a partículas magnéticas separa el complejo estradiol/estradiol
marcado - anticuerpo, de los componentes no enlazados. Una incubación ulterior con sustrato produce color en proporción inversa a la cantidad del estradiol presente. El ensayo tiene cinco etapas principales:
El agente desplazante y el anticuerpo anti-estradiol conjugado con el ITCF se incuban con la muestra (150 mL) durante 20 minutos a 37°C.
Se añade el trazador de estradiol marcado con fosfatasa alcalina y se continúa la incubación durante otros 20 minutos a 37°C.
Se añade el anticuerpo anti-ITCF acoplado a partículas magnéticas y se incuba durante 5 minutos a 37°C. Luego se aisla el anticuerpo anti-estradiol mediante un paso de lavado magnético.
Se incuba un sustrato enzimático con las partículas durante 30 minutos a 37°C. La presencia de la fosfatasa alcalina provoca un cambio de color de amarillo a rosado. La reacción se termina con la adición de Buffer de Parada.
Luego los tubos se colocan en el espectrofotómetro o colorímetro. Se puede medir la densidad óptica de cada tubo (a 550nm) y los resultados se calculan usando un programa de procesamiento de datos.
Patrones de IEE de Estradiol Antisuero de IEE de Estradiol Reactivo de Separación de IEE de Estradiol Marca Enzimática de IEE de Estradiol Concentrado de Lavado de IEE de Estradiol Diluyente de Suero de IEE de Estradiol
Reactivo de Sustrado de IEE Buffer de Sustrado de IEE Buffer de Parada de IEE Muestra QC Interna de IEE de Estradiol Folleto de instrucciones
Equipo Requerido
Tubos de ensayo, pipetas, mezcladora multivortex, separador magnético, baño de maría de 37°C y un colorímetro o espectrofotómetro.