L'essai est un IEE direct compétitif pour la mesure quantitative d'Estradiol du sérum ou plasma humain. Le Estradiol est deplacé des proteines liées par un agent spécifique, en le rendant disponible pour agglutination avec des anticorps. Estradiol réagit alors successivement avec un anticorps anti Estradiol lié à isothiocyanate de fluoresceine (ITCF) et Estradiol marqué avec phosphatase alcaline. Ensuite, un anticorps anti ITCF lié a des particules magnétiques sépare le complexe estradiol/estradiol marqué-anticorps, des composants non liés. Une incubation ultérieur avec du substrat produit la couleur en proportion inverse a la quantité d'estradiol présente. L'essai a cinq étapes principales:
L'ágent déplaceur et l'anticorps anti-estradiol conjugué à l'ITCF est incubé avec l'échantillon (150µL) pour 20 minutes à 37°C.
Le traceur d'estradiol marqué a la phophatase alcaline est ajouté et l'incubation continue 20 minutes de plus à 37°C.
L'anticorps ICTF associé aux particules magnétiques est ajouté puis incubé pendant 5 minutes a 37°C. L'anticorps anti-estradiol est isolé alors au moyen d'un pas de lavage magnétique.
Un substrat de l'enzyme colorée est incubé avec les particules pendant 30 minutes à 37°C. La présence de phosphatase alcaline provoque un changement de la couleur du jaune au rose. La réaction est terminée par l'addition de Tampon d'Arrêt.
Les tubes sont placés alors dans le spectrophotométre ou colorimétre. La densité optique de chaque tube (a 550 nm ) peut être mesuré et les resultats calculés en utilisant un programme pour procésser les données.
Étalons IEE de l'Estradiol Antiserum IEE de l'Estradiol Réactif de Séparation IEE de l'Estradiol Marque Enzymatique IEE de l'Estradiol Concentré de Lavage IEE de l'Estradiol Diluant de Serum IEE de l'Estradiol
Reactif de Substrat IEE Tampon de Substrat IEE Tampon d'Arrêt IEE Échantillon QC Interne IEE de l'Estradiol Brochure d'Instructions
Materiel Exige
Tubes d'essai, pipettes, agitateur multivortex, séparateur magnétique, bain de Marie à 37°C et colorimètre ou spectrophometre