L'essai est un IEE compétitif direct pour faire des mesures quantitatives de Thyroxine Totale (T4 Total) du serum ou plasma humain. Un agent spécifique déplace T4 des protéines liées, en le rendant disponible pour agglutination des anticorps. T4 équilibre alors avec T4 marqué avec fluoresceine (Dérivé de T4) et la lie avec une quantité limité del'anti-corps anti-T4 marqué avec phosphatase alcaline. Une incubation ultérieur avec du substrat produit la couleur en proportion inverse a la quantité de T4 présente. L'essai a quatre etapes principales :
L'agent deplaceur, l' anticorps anti-T4 marqué avec phosphatase alcaline, et le dérivé de la fluoresceine du T4 sont incubés avec l'échantillon (50µL) pendant 15 minutes à 37°C.
L' anticorps anti -fluorescein associé aux particules magnétiques est ajouté et incubé pendant 10 minutes à 37°C. L'anti corps anti-T4 est ensuite isolé au moyen d'un pas de lavage magnétique.
Un substrat coloré de l'enzyme est incubé avec les particules pendant 15 minutes à 37°C. La présence de phosphatase alcaline provoque un changement de la couleur du jaune au rose. La réaction est terminée par addition de Tampon d'Arrêt.
Les tubes sont placés alors dans le spectrophotomètre ou colorimètre. La densité optique (à 550nm) de chaque tube peut être mesuré et les résultats sont calculés en utilisant un programme qui traite les données.
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